科研ELISA試劑盒不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原

科研ELISA試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包括板內(nèi)差異性、板間差異性、批間差異性、重復(fù)性、特異性及交叉反應(yīng)性、回收率等。如果實(shí)驗(yàn)君經(jīng)常開展ELISA實(shí)驗(yàn)，建議使用同一廠家的試劑盒，這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復(fù)性（當(dāng)然前提是實(shí)驗(yàn)條件的一致性）。對于科研用的定量ELISA試劑盒，不同的生產(chǎn)廠家使用的抗體對、酶以及底物、生產(chǎn)工藝和研發(fā)實(shí)力不盡相同，自然不同廠家試劑盒測出的數(shù)據(jù)會有差異。
一般的科研ELISA試劑盒都經(jīng)過血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的驗(yàn)證。在選擇試劑盒時，好要詳細(xì)閱讀說明書，比如血漿樣本抗凝劑的使用是否與試劑盒兼容。另外，在某些情形下樣品中會存在干擾因素比如溶血血漿、高脂肪含量的樣品、人抗鼠抗體（HAMA）、細(xì)胞培養(yǎng)上清中含胎牛血清等。因此需根據(jù)樣品來選擇試劑盒，必要時還要根據(jù)樣本來適當(dāng)優(yōu)化。或在樣品收集前，好先閱讀一些可靠供應(yīng)商試劑盒的說明書或直接咨詢。如果您的樣品為組織或細(xì)胞裂解物，則需要更謹(jǐn)慎的選擇試劑盒。市面上大多數(shù)的商業(yè)化試劑盒沒有經(jīng)過多種來源組織樣本的驗(yàn)證。這需要實(shí)驗(yàn)君能理解不是所有試劑盒所用的抗體對，都能特異的從一堆裂解物蛋白中特異檢出您的目的蛋白，還要考慮組織樣品的基質(zhì)效應(yīng)等。但如果實(shí)驗(yàn)君要了解組織樣品的制備問題，我們另起一文來總結(jié)。
科研ELISA試劑盒技術(shù)可用于測定抗原，也可用于測定抗體。ELISA方法中有三個必要的試劑：
（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"；
（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"；
（3）酶反應(yīng)的底物。
一般可將科研ELISA試劑盒分為以下幾種類型，實(shí)驗(yàn)君首先需要根據(jù)自己的待檢物來確定試劑盒類型。
1）科研ELISA試劑盒雙抗體夾心法：針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測抗體。適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原如血漿中的細(xì)胞因子，科研ELISA試劑盒不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原。同理，也有雙抗原夾心法測抗體。
2）科研ELISA試劑盒直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗，即可測定抗原總量。此法操作手續(xù)簡短，因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。
3）間接法：間接法是檢測抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）來檢測與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。
4）科研ELISA試劑盒競爭法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法模式。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。