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豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見問題解答

更新時間：2020-07-27

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　　豚鼠ELISA試劑盒操作流程和常見問題解答

　　豚鼠ELISA試劑盒操作流程如下：

　　（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

　　（2）酶標板置4℃，包被過夜。

　　（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

　　（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

　　（5）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　（6）洗板，同（4）。

　　（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

　　（8）酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。

　　（9）洗板，同（4）。

　　（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。

　　（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。

　　（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　　（13）數據處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

　　介紹一下豚鼠ELISA試劑盒實驗操作的常見問題。

　　一、一次ELISA實驗需要多長時間？

　　雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時，競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時。

　　二、血清樣本如何處理？

　　全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　三、血漿樣本如何處理？

　　建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　四、細胞上清液樣本如何處理？

　　檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（1000×g）。仔細收集上清。