單寧含量檢測試劑盒說明書

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體100mL×2瓶，4℃保存。試劑一：粉劑×1瓶，常溫保存。

微量法

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，10mg單寧酸，4℃保存。臨用前加入1.175mL提取液溶解為5000nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明：

單寧又稱植物多酚，是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物。單寧可作為潛在的生物標(biāo)記物；與蛋白質(zhì)結(jié)合的能力又稱為收斂性或澀性。其收斂性是多種生理活性的基礎(chǔ)，如止血、抗腫瘤、抗衰老等生理活性，也是影響產(chǎn)品口感的因素之一。

根據(jù)光譜特性，單寧在275nm下有較強(qiáng)的紫外吸收，通過利用活性炭能夠特異吸附單寧的性質(zhì)來檢測單寧含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板和蒸餾水。

測定操作：

1、樣本處理：

將樣本烘干至恒重，粉碎，過40目篩之后，稱取約0.05g，加入1mL提取液，封口膜封口防止液體濺出，于70℃水浴提取30min，期間可搖晃數(shù)次。12000rpm，25℃，離心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待測。

2、操作步驟：

（1）紫外分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，波長調(diào)至275nm。蒸餾水調(diào)零。

（2）將5000nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為6.25、3.125、1.5625、0.78625、0.4、0.2nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（3）加樣表：

充分混勻震蕩5min，13000g 離心20min。取200µL上清液測定275nm下的吸光度，分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管，計算?A測定=A對照管-A測定管，A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。

單寧含量計算：

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，以A標(biāo)準(zhǔn)為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程y=kx+b，將?A測定帶入方程中得到x（nmol/mL）

2、單寧含量計算：

1. 按蛋白濃度計算：

單寧含量（nmol/mg prot）=x×V提取÷(V提取×Cpr) =x÷Cpr。

2. 按樣本鮮重計算：

單 寧 含 量 （nmol/g 鮮 重 ）=x×V 提 取 ÷W =x÷W 。Cpr： 樣品蛋白濃度，mg/mL（蛋白濃度需重新用PBS提取測定）；W：樣品質(zhì)量，g；V提取：

提取液體積，2mL。

注意事項(xiàng)：

1、 當(dāng)?A大于1.5時，建議將樣品上清液用提取液稀釋更大倍數(shù)后測量；?A過小時，建議減少稀釋倍數(shù)或增加樣品質(zhì)量來測定。