ADH，使用犬抗利尿激素ELISA試劑盒需要注意什么？

ADH，使用犬抗利尿激素ELISA試劑盒需要注意什么？

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被犬抗利尿激素（ADH）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬抗利尿激素（ADH）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

1.  檢測范圍：1 pg/mL – 32 pg/mL。

2.  靈敏度：檢測濃度小于0.1 pg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

 重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15%

犬抗利尿激素（ADH）ELISA試劑盒的工作原理基于酶聯免疫吸附測定（ELISA）技術，具體流程如下：

1. ?固相抗原包被?

微孔板預先包被與犬ADH結構相似的抗原（可能為重組ADH或合成多肽）?27。該抗原通過物理吸附固定在孔板表面，保留免疫學活性?46。

2. ?競爭性結合反應?

• ?樣品/標準品處理?：待測犬樣本（如血清、血漿）中的ADH與生物素標記的ADH類似物同時加入孔板?78。

• ?競爭結合?：樣本中的天然ADH與生物素標記的ADH競爭結合孔板中有限的ADH特異性抗體結合位點?37。ADH濃度越高，與抗體結合的生物素標記ADH越少，形成競爭性抑制關系?38。

3. ?洗滌與信號放大?

• ?去除未結合物質?：洗滌去除未結合的游離ADH和抗體復合物?46。

• ?酶標二抗結合?：加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素，與生物素標記的ADH-抗體復合物結合?38。

4. ?顯色與定量分析?

• ?底物反應?：加入TMB顯色底物，HRP催化底物生成藍色產物，反應終止后變為黃色?46。

• ?濃度計算?：通過檢測450 nm波長下的吸光度值，吸光度與樣本中ADH濃度呈負相關（即ADH濃度越高，顯色越淺）?37。標準曲線法可精確計算ADH濃度?38。

?技術特點?

• ?檢測范圍?：通常覆蓋pg/ml級別（如0.781-50 pg/ml），靈敏度高?37。

• ?特異性?：依賴抗體對ADH的特異性識別，可排除其他類似結構干擾?27。

• ?應用場景?：適用于犬體液樣本中ADH的定量檢測，用于研究水電解質平衡、腎功能異常等?

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