魚ELISA試劑盒樣品采集及血清分離中要注意避免細(xì)菌污染

魚ELISA試劑盒樣品收集和保存：
用于ELISA測(cè)定常用的臨床標(biāo)本是血清（漿）。要注意避免嚴(yán)重溶血，因?yàn)檠t蛋白中含有具有類似過氧化物活性的血紅素基團(tuán)，在孵育時(shí)很容易吸附于固相，與HRP底物反應(yīng)產(chǎn)生假陽(yáng)性。
魚ELISA試劑盒樣品采集及血清分離中要注意避免細(xì)菌污染，一方面細(xì)菌分泌的酶可能對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用，另一方面，細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會(huì)對(duì)相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
魚ELISA試劑盒樣品應(yīng)該要避免反復(fù)凍融。因反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。另外，樣品混勻時(shí)，不要?jiǎng)×艺袷?，反?fù)顛倒混勻即可。
一般而言，如果在收集樣品的當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)，可將樣品及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?；而?duì)隔天再檢測(cè)的樣本，應(yīng)及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，若要長(zhǎng)期保存樣品，好將其置于-70℃凍存。
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
1、魚ELISA試劑盒試劑準(zhǔn)備
在實(shí)驗(yàn)開始前，需將試劑盒從冰箱中拿出來在室溫放置20min，再進(jìn)行測(cè)定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡，也可使溫育時(shí)反應(yīng)孔內(nèi)的溫度能較快的達(dá)到所要求的高度，以滿足測(cè)定要求。
其次，目前商品中ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)其所提供的濃縮液進(jìn)行稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)該保證質(zhì)量。此外，底物反應(yīng)液應(yīng)該反應(yīng)顯色前進(jìn)行現(xiàn)配現(xiàn)用。同時(shí)，為了保證實(shí)驗(yàn)的均一性，實(shí)驗(yàn)中所有試劑在加樣前必須搖勻。
2、魚ELISA試劑盒加樣
因ELISA的靈敏度較高，則應(yīng)該按規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。
加樣品時(shí)，單孔用量要求：≥20ul/指標(biāo)，如需要做2個(gè)復(fù)孔則血量≥60ul/指標(biāo)。如果用量充足，好提供50ul/孔/指標(biāo)。具體用量也需根據(jù)試劑盒的要求而定。
吸取樣品時(shí)，加樣槍頭不應(yīng)粘附多余的液體；加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體，否則會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上，加樣不準(zhǔn)確。正確加樣方法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入。
加樣時(shí)速度不可過快，否則無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性；要避免樣品加在孔壁上部而產(chǎn)生非特異性吸附。不可將樣品濺出以避免對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。